除了两位水管工兄弟,游戏中的经典角色也在电影中亮相。碧姬公主作为蘑菇王国意志坚定的统治者,在片中对马力欧进行了严酷的作战训练,以帮助后者挖掘自身潜力。喜剧演员杰克·布莱克、塞斯·罗根则为片中的大反派酷霸,以及“搞笑担当”大猩猩咚奇刚配音。值得一提的还有,为游戏中的马力欧和路易吉兄弟配音长达三十余年的查尔斯·马丁内斯,也在片中友情客串。该案件督促美国政府成立了一个新的执法机构——为人熟知的联邦调查局(FBI),和FBI创始人埃德加·胡佛的崛起:随着死亡人数的上升,新成立的联邦调查局着手调查此案,揭开了可怕的阴谋。
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